Fluorescenční mikroskopie
A fluorescenční mikroskop používá rtuť ani xenonovou lampu produkují ultrafialové světlo. Světlo přichází do mikroskopu a zasáhne dichroický zrcadlo - zrcadlo, které odráží jednu řadu vlnových délek a umožňuje další rozsah projít. Dichroický zrcadlo odráží ultrafialové světlo až do vzorku. Ultrafialové světlo vzrušuje fluorescenci v rámci molekul ve vzorku. Čočka objektivu shromažďuje fluorescenční vlnové délky světla produkoval. Tento fluorescenční světlo prochází dichroické zrcadlo a bariérovou filtrem (který odstraňuje jiné než fluorescenční vlnové délky), takže je na okuláru pro vytvoření obrazu.
Fluorescenční molekuly ve vzorku může být buď přirozeně vyskytují nebo být zavedeny , Například, můžete skvrna buňky s barvivem volal kalceinem /AM. Sama o sobě tato barvivo není fluorescenční. AM část molekuly skrývá část kalceinu molekuly, která se váže vápník, což je fluorescenční. Při smíchat kalceinu /AM se roztok ke koupání buňky, barvivo kříže do buňky. Živé buňky mají enzym, který odstraní AM část, lapáky kalcein v buňce, a umožňuje kalceinu vázat vápník tak, aby se fluoreskuje zeleně pod ultrafialovým světlem. Mrtvé buňky již nemají tento enzym. Proto se živé buňky fluoreskují zeleně, a mrtvé buňky nebudou fluoreskují. Můžete vidět mrtvé buňky ve stejném vzorku, když smícháte v jiném barvivo zvané propidiumjodidem, který proniká pouze odumřelé buňky. Propidium jodid se váže na DNA v jádru a fluoreskuje červeně pod ultrafialovým světlem. Tento double-barvivo technika se používá v toxikologických studiích ke stanovení procenta buněčné populace, která je zabit, když reaguje s nějakým chemickým v oblasti životního prostředí, jako je například pesticid.
Fluorescenční obraz kultivovaných rat-mozkových buněk. Živé buňky skvrna s kalceinu (vlevo) a odumřelých buněk skvrnu propidiumjodidem (vpravo).
Foto se svolením Theresa M. Freudenrich
fluorescenčního obrazu kultivovaných krysích-mozkových buněk. Živé buňky skvrna s kalceinu (vlevo) a odumřelých buněk skvrnu propidiumjodidem (vpravo).
Foto s laskavým svolením Theresa M. Freudenrich
Fluorescenční-mikroskopické techniky jsou užitečné pro vidění struktur a měření fyziologick
